本期目录
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生物技术进展
2016年 第6卷 第4期
发布日期：2016-07-25
进展评述
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CHO细胞表达系统研究进展
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郑惠惠,江洪
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2016 Vol. 6 (4):
239-243.
DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2016.04.03
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摘要 (
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CHO细胞表达系统是目前重组糖蛋白生产的首选系统。随着无血清悬浮培养技术、基因工程技术和大规模培养技术的应用和不
断发展，CHO细胞表达系统已经成为生物技术药物最重要的表达或生产系统，并被广泛应用于抗体、重组蛋白药物和疫苗等产
品的研发和生产中。近年来，针对CHO细胞表达系统在某些重组蛋白的表达和大规模生产中存在的不足，研究者们通过利用基
因工程技术手段，结合重组蛋白表达机制的研究成果，为优化和应用CHO细胞表达系统做出了不懈努力。从培养基的优化、高
产重组CHO细胞株的构建、大规模培养三个方面综述了CHO细胞表达系统的最近研究进展，以期为CHO细胞表达系统的研究与应
用提供参考。
研究论文
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铅和邻苯二甲酸二丁酯联合暴露对斑马鱼胚胎的影响
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刘红阳,茆广华,许海,冯伟伟,赵婷,丁阳阳,陈瑶,仰榴青,吴向阳
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2016 Vol. 6 (4):
249-254.
DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2016.04.05
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摘要 (
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(1429KB)(
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为了研究铅（Pb）和邻苯二甲酸二丁酯（DBP）单独及联合暴露对斑马鱼胚胎神经发育和细胞凋亡相关基因表达的影响，考察
两者对斑马鱼胚胎神经系统的毒性作用。将720个斑马鱼胚胎按3×3析因设计随机分为9组，以Pb（0、0.01 mg/L和1 mg/L）和
DBP(0、0.005 mg/L和0.5 mg/L）单独及联合对斑马鱼胚胎暴露120 h。观察、记录胚胎的孵化、死亡情况，采用荧光定量PCR
测定斑马鱼胚胎神经发育相关基因（NR1A、NR2A、NR2D）和神经细胞凋亡相关基因（bcl-2、c-fos）的表达变化情况。与空白
对照组相比，各暴露组均可致斑马鱼胚胎孵化率降低、死亡率增高(P＜0.05)；联合暴露组NR1A、NR2A、NR2D、c-fos基因表达
水平显著升高， bcl-2基因表达水平显著下降(P＜0.05)。Pb和DBP均可影响斑马鱼胚胎的发育，且具有一定的神经毒性，而二
者联合暴露毒性复杂，对斑马鱼胚胎孵化率和死亡率的影响有交互作用，对神经发育和细胞凋亡相关基因无交互作用，其机制
有待进一步研究。
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基于β-半乳糖苷酶为报告基因的耐辐射异常球菌启动子检测载体构建
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李杰,张陈,张维,周正富
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2016 Vol. 6 (4):
265-270.
DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2016.04.08
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摘要 (
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耐辐射异常球菌是一种超强电离辐射抗性的微生物, 其含有大量的胁迫反应相关蛋白及其转录调控因子,在适应环境变化和各种胁迫反应中发挥着重要作用。为深入分析该菌的抗逆基因在不同胁迫下的功能，以β-半乳糖苷酶为报告基因构建了耐辐射异常球菌启动子检测体系。以耐辐射异常球菌基因组为模板扩增groEL、hsp20、relA和relQ启动子片段，将其连接到到大肠杆菌-耐辐射异常球菌穿梭载体pRADZ1上, 构建成具有启动子活性检测功能的重组质粒pRADZ-PgroE、pRADZ-Phsp20、pRADZ- PrelA和pRADZ-PrelQ，并将其转化至耐辐射异常球菌，测定β-半乳糖苷酶酶活。结果显示，这些启动子能在耐辐射异常球菌中启动Lac-Z报告基因的表达，并受到胁迫条件的诱导调控。耐辐射异常球菌启动子活性检测方法构建为该菌株特异性胁迫应答系统的研究提供了重要的实验基础。
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基于CNKI的猪蓝耳病文献计量分析
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李立虎,陈磊,江懿,任竹
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2016 Vol. 6 (4):
283-287.
DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2016.04.11
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摘要 (
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为了解我国猪蓝耳病研究的现状和热点，以2004-2015年CNKI数据库收录的SCI、EI、核心以及 CSSIC 来源期刊的论文数据为
对象，从论文的发表时间、论文所覆盖的学科、论文所属的期刊分布、论文研究层次分布、主要基金项目来源、作者和研究机
构、关键词词频等方面进行了统计和比较。我国猪蓝耳病研究相关论文主要集中于畜牧与动物医学、生物学等学科；猪蓝耳病
研究相关论文发表数量最多的年份是2008年；核心期刊《动物医学进展》载文最多，畜牧兽医、动物相关期刊是猪蓝耳病研究
论文发表的主要期刊；主要研究学者大多集中在科研院所和高等院校，其中论文数量发表最多的研究机构是南京农业大学；目
前猪蓝耳病研究领域的热点主要包括病毒的遗传变异规律、疫苗的研制和猪蓝耳病的有效防控。防控猪蓝耳病最有效的手段就
是接种疫苗，但是传统的控制方法，对于新出现的变异蓝耳病病毒并不能提供足够的保护，加强猪蓝耳病病毒遗传变异的监测
，掌握病毒的变异趋势是当前猪蓝耳病研究的前沿领域，而研发更为有效的疫苗将成为未来的研究重点。
技术与方法
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利用微滴数字PCR方法快速分析转基因玉米中外源基因的拷贝数
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姜志军,江颖,徐摇光,张立全,张晓东,
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2016 Vol. 6 (4):
288-294.
DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2016.04.12
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摘要 (
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以玉米自交系501幼胚为受体材料，首先将来自球形节杆菌的EPSPS基因（G23V）按玉米密码子偏爱性进行优化与人工合成，并
且将其克隆到表达载体pBAC9200中；然后利用农杆菌介导法将质粒载体转入玉米自交系501的幼胚中。经过愈伤诱导、草甘膦
抗性筛选和分化培养最终获得14株转化再生植株。经PCR、RT-PCR检测表明，其中5株目的基因G23V-EPSPS稳定整合且在转录水
平获得表达。随后，利用微滴数字PCR技术对外源基因拷贝数进行了检测分析，分析结果表明在5株阳性转基因植株中，外源基
因G23V-EPSPS拷贝数分别为0.12、1.0、0.9、1.89和0.66，介于0-2之间。成功建立了草甘膦抗性基因G23V-EPSPS在玉米中的
遗传转化体系，为以新型高抗草甘膦G23V-EPSPS基因作为转基因玉米筛选标记基因奠定了基础；而且以微滴数字PCR技术代替
传统的Southern Blot简便快速的完成外源基因拷贝数的分析，为微滴数字PCR技术在转基因外源基因拷贝数检测上的广泛应用
做了初步的探索。
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基于16S rRNA基因文库技术分析水性涂料菌群的多样性
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黄小茉,陶宏兵,邱晓颖,李良秋,施庆珊
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2016 Vol. 6 (4):
295-298.
DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2016.04.13
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摘要 (
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采用未培养技术直接提取变质涂料微生物总DNA，使用通用引物进行PCR扩增、纯化、连接、克隆和测序，建立16S rRNA基因文
库，分析变质水性涂料细菌的数量与种类。从96个克隆子中共检测到8种不同种属的细菌，假单胞菌属(Pseudomonas)为优势菌
群，占总数的75%，软骨酸芽孢杆菌(Paenibacillus chondroitinus)占总数的15%，此外豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)和
粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)分别占总数2%。结果表明16S rRNA基因文库是一种较好的研究水性涂料细菌群落多样性的
方法。
试验报告
京公网安备11010802021232号