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• 生物技术进展
  2014年 第4卷 第4期 发布日期：2014-07-25

进展评述

• 超突变细胞在进化工程中的开发与应用
• 栾国栋,蔡真,李寅
• 2014 Vol. 4 (4): 229-235. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2014.04.01
• 摘要 ( ) PDF (1174KB)( )
• 通过进化工程技术改造微生物细胞的生理表型是生物技术和生物炼制领域的重要研究方向，但是现阶段的各种进化工程技术面临效率低或连续性差的问题。超突变细胞能够进行自发、连续的胞内诱变，将其应用于进化工程技术能够实现连续、高效的菌种改造。本文详细介绍了自然界中超突变细胞产生的遗传机制和相应的人工超突变细胞的构建策略，以及应用此类超突变系统在微生物细胞生理性能改造和蛋白质突变体文库高效构建上取得的进展。随着相关领域认识和技术的加强，未来人工超突变细胞的构建将继续向着不同维度上可控性、靶向性不断提高的方向发展，从而为细胞和蛋白的改造提供更强更优的进化动力。

• 可视安全标记花青素合成途径相关基因在植物转化研究中的应用进展
• 杜建中,赵欣梅,王长彪,郝曜山,王亦学,张欢欢,孙毅
• 2014 Vol. 4 (4): 236-244. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2014.04.02
• 摘要 ( ) PDF (1247KB)( )
• 近年来有关转基因产品可能带来的环境和食品安全问题的争论多集中在作为标记基因的抗生素抗性基因以及抗除草剂基因的广泛使用。因此寻找安全、有效的标记基因替代上述有争议标记基因就显得十分必要和紧迫。花青素合成酶类及其合成调控因子可以控制植物体内的色素合成，一些转化研究已证明其转化体表型发生了颜色改变。加之花青素类物质是一些天然色素，对人类有利而无害，可以利用花青素的这些特点，将花青素合成酶类及其调控因子基因作为一类可视化、安全和有效的标记基因来转化植物。本文就可视安全标记花青素合成酶类基因及其调控基因在植物转化研究中的应用进展进行了简要介绍,以期为提高标记基因的安全性提供参考。

• 几种基于PCR的分子标记在甘薯遗传多样性研究中的应用
• 何虎翼,谭冠宁,何新民,何海旺,李丽淑,唐洲萍,王晖
• 2014 Vol. 4 (4): 245-250. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2014.04.03
• 摘要 ( ) PDF (1144KB)( )
• 遗传多样性是甘薯品种遗传改良的基础。由于分子标记具有数量极大、不受环境及基因表达与否的限制、多为共显性、不影响生物性状表现等优点，现已在甘薯遗传多样性研究中得到广泛应用。本文比较了RAPD、AFLP、SSR、ISSR和SRAP等几种基于PCR的分子标记方法，分别从遗传差异和亲缘聚类分析两方面，对它们在甘薯遗传多样性研究中的应用进行了综述。对比分析表明ISSR是一种共显性、成本较低、重复性好、多态性较高且非常有发展前途的分子标记，并已经被广泛应用到甘薯遗传多样性、物种亲缘关系、系统分类和辅助育种研究中。

• 灰霉病菌抗药位点及其分子检测方法研究进展
• 张鑫,马雪梅
• 2014 Vol. 4 (4): 251-257. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2014.04.04
• 摘要 ( ) PDF (1346KB)( )
• 灰霉病由灰葡萄孢侵染所致，化学防治是目前最常用的治理方法，而随着杀菌剂的广泛使用，抗药菌株频繁出现。本文就近年来已研究报道的灰葡萄孢菌的抗药分子位点进行了系统总结，包括六大类杀菌剂，涉及5个基因；对灰霉病菌抗药位点的分子检测方法进行了综述，包括测序法、CAPS、ARMS、Tetra primer ARMS-PCR、AS real-time PCR、ASPPAA PCR和双杂交探针法，通过对不同检测方法进行比较分析，指出现有技术存在的问题并展望未来高通量的检测方法的发展方向。

• 干细胞技术的研究热点领域与最新进展
• 熊鹰,余欢欢,张龙威,王琦
• 2014 Vol. 4 (4): 258-262. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2014.04.05
• 摘要 ( ) PDF (1128KB)( )
• 近两年在干细胞分离鉴定、诱导分化、重编程调控机制、可塑性与疾病治疗等方面取得了重大突破，使得干细胞技术从一种实验室概念逐渐转变成用于医学治疗的实际手段。本文分别从以上四个热点领域介绍了2013-2014年国内外干细胞的最新研究进展，并对干细胞研究中存在的问题进行了初步分析，为研究者提供参考。

• 替莫唑胺局部缓释制剂的研究进展
• 张晶晶,王永峰,王国成,杨海龙,范立君
• 2014 Vol. 4 (4): 263-267. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2014.04.06
• 摘要 ( ) PDF (1123KB)( )
• 近年来，为更有效地发挥替莫唑胺对神经胶质瘤的治疗活性，局部、缓释给药成为替莫唑胺的研究热点。本文简述了几种研发中的替莫唑胺的局部缓释新制剂，其中替莫唑胺-聚酸酐缓释微球(TMZ-pCPP：SA)由于聚酸酐表面溶蚀等特性，具有良好的缓释特性，鼠颅内植入试验显示，比口服替莫唑胺具有更好的治疗效果，因此替莫唑胺-聚酸酐缓释微球作为颅内缓释制剂具有极为光明的前景。

研究论文

• 水稻中一个油菜素内酯不敏感突变体的图位克隆
• 祝步拓,张芊,路铁刚
• 2014 Vol. 4 (4): 268-273. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2014.07
• 摘要 ( ) PDF (2595KB)( )
• 油菜素内酯(brassinosteroid， BRs)是一类重要的植物激素，在植物的生长发育过程中发挥重要的调节作用。BRs的信号转导研究在双子叶植物拟南芥中已取得重大进展，但在单子叶植物水稻中，BRs的信号转导途径尚不很清楚。本研究从水稻T-DNA插入突变体库中筛选出一个叶片直立突变体el(erect leave mutant)。该突变体与野生型植株相比，叶夹角减小。遗传分析显示，el的突变性状由一对显性基因控制。该基因经图位克隆定位于水稻第5染色体引物InDel3和InDel4之间，物理距离为700 kb。本研究明确了一个水稻BRs不敏感突变体的表型特征及遗传规律，为进一步研究水稻BRs信号转导调控机制奠定基础。

• 棉花WRKY基因GhWRKY25的克隆和表达分析
• 杨淑巧,王志安,张安红,许琦,肖娟丽,罗晓丽
• 2014 Vol. 4 (4): 274-279. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2014.04.08
• 摘要 ( ) PDF (1901KB)( )
• 棉花是一种重要的经济作物，在国民生产中起着重要的作用。然而干旱盐碱等不良环境严重地制约着棉花的种植区域及其产量和品质。近年来，利用分子育种改良棉花对这些逆境的耐性的研究成为热点。本文从棉花中克隆了一个对干旱和盐碱具有应答的WRKY基因，定名为GhWRKY25。该基因编码的蛋白包含两个典型的WRKY结构域，每个WRKY结构域的C端含有一个C2H2类型的锌指蛋白结构，进化树分析表明其属于Ⅰ类WRKY蛋白，与可可的WRKY3同源性最高。利用qPCR分析发现该基因在棉花里为组成型表达，但在花中表达量较高。GhWRKY25在施用SA、JA、ABA、GA 中表达表现为上调。干旱和NaCl处理时发现GhWRKY25基因表达均显著上调。通过上述结果可以推测GhWRKY25在棉花对于逆境的适应中具有重要的作用，为该基因功能的进一步研究提供基础。

• 转vgb基因油菜的耐涝性
• 李培玉,张锐,孙国清,马林,薛计雄, ,林芹,郭三堆
• 2014 Vol. 4 (4): 280-285. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2014.04.09
• 摘要 ( ) PDF (3646KB)( )
• 油菜是我国重要的油料作物和蛋白质饲料作物，涝害严重影响了我国油菜产业的发展，提高油菜的耐涝能力对于我国油菜可持续发展具有非常重大的意义。本研究采用PCR、Southern杂交等方法对转vgb基因油菜植株进行鉴定，15 d淹涝实验结果显示，转基因油菜的超氧化物歧化酶、丙二醛和脯氨酸含量在淹涝前后的变幅显著低于对照。对淹水后的农艺性状进行调查，转vgb基因的油菜相比较对照抗涝性明显得到增强，证明vgb基因在油菜中的表达对油菜的抗涝性具有显著作用。

• RAPD及SRAP两种分子标记技术对苦瓜杂交种纯度的鉴定分析
• 张少平,张玉灿,张伟光,赖正锋,郑云云,陈玉水
• 2014 Vol. 4 (4): 286-291. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2014.04.10
• 摘要 ( ) PDF (2666KB)( )
• 以F1代苦瓜杂交种如玉11号及其亲本为材料，利用RAPD及SRAP两种分子标记技术对这3种苦瓜基因组DNA进行比较分析，以获得该杂交种及其亲本（或母本）差异目的基因片段。经过多次对该3种苦瓜叶片DNA提取，PCR扩增及其PCR产物的琼脂糖凝胶电泳分析，在供试的46个RAPD引物及121对SRAP引物中，筛选出1个RAPD引物及1对SRAP引物能区分该苦瓜杂交种及其母本种子，通过进一步验证分析，证明该两种分子标记的特异引物可作为如玉11号苦瓜杂交种子的纯度鉴定之用。

• 连翘有效成分提取及提取物对奶牛乳房炎致病菌的抑制效果
• 周艳,张涛,郑勤琴,杨承霖,樊皓月
• 2014 Vol. 4 (4): 292-295. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2014.04.11
• 摘要 ( ) PDF (2295KB)( )
• 中药连翘具有抗菌、消炎、解热等作用，本研究目的在于摸索连翘有效成分提取的试验方法，获得适于抑制奶牛乳房炎致病菌的有效成分。以连翘叶片为材料，利用回流法提取工艺提取，采用薄层色谱（TLC）测定法定性分析，高效液相色谱法（HPLC）测定有效成分纯度，抑菌圈检测法检测抑菌效果。结果表明，连翘提取物对奶牛乳房炎致病菌具有抑制效果。

技术与方法

• 葡萄糖酸钠发酵过程中对pH细化控制的研究
• 周生民,赵伟,冯文红,段莹莹,曹大鹏
• 2014 Vol. 4 (4): 296-298. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2014.04.12
• 摘要 ( ) PDF (1138KB)( )
• 在黑曲霉发酵生产葡萄糖酸钠的过程中，通过在不同发酵阶段控制不同的pH，可缩短生产周期，提高生产效率。比较5 L发酵罐中控制pH 5.0、pH 5.2、pH 5.4、pH 5.6条件下葡萄糖酸钠发酵情况，通过在线检测系统和离线数据分析，考察不同pH对降糖速率和葡萄糖氧化酶活性的影响，确定发酵前期pH控制在5.6，后期pH控制在5.2。