重组胰蛋白酶在原代地鼠肾细胞组织分离中的应用

doi:10.19586/j.2095-2341.2024.0074

生物技术进展 ›› 2025, Vol. 15 ›› Issue (1): 152-157.DOI: 10.19586/j.2095-2341.2024.0074

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重组胰蛋白酶在原代地鼠肾细胞组织分离中的应用

乔建¹(), 曾帅², 张杨², 徐葛林³

^1.武汉生物制品研究所有限责任公司生产技术部，武汉 430207
^2.武汉生物制品研究所有限责任公司乙脑疫苗室，武汉 430207
^3.武汉生物制品研究所有限责任公司轮状病毒疫苗室，武汉 430207

收稿日期:2024-04-08 接受日期:2024-07-05 出版日期:2025-01-25 发布日期:2025-03-07
作者简介:乔建E-mail：qiaojian0306@163.com

Application of Recombinant Trypsin in Tissue Isolation of Primary Hamster Kidney Cells

Jian QIAO¹(), Shuai ZENG², Yang ZHANG², Gelin XU³

^1.Production Technology Department of Wuhan Institute of Biological Products Co. ，Ltd. ，Wuhan 430207，China
^2.Japanese Encephalitis Vaccine Laboratory of Wuhan Institute of Biological Products Co. ，Ltd. ，Wuhan 430207，China
^3.Rotavirus Vaccine Laboratory of Wuhan Institute of Biological Products Co. ，Ltd. ，Wuhan 430207，China

Received:2024-04-08 Accepted:2024-07-05 Online:2025-01-25 Published:2025-03-07

摘要/Abstract

摘要：

为探究重组胰蛋白酶替代猪源性胰蛋白酶在乙型脑炎减毒活疫苗制备中的可行性，在相同的酶活力条件（总酶活力均为315 200 U）下，利用猪源性胰蛋白酶、源于大肠杆菌BL21（DE3）表达系统的重组胰蛋白酶，以及源于毕赤酵母（X-33）表达系统的重组胰蛋白酶，分别消化原代地鼠肾块，各组实验均保持相同的消化温度和消化时间。结果发现，经上述3种胰酶消化后，细胞的分散效果及细胞生长状态均表现良好，且在培养第3天的细胞铺展率上，各组间并未显示出明显差异（P>0.05）。进一步在病毒培养阶段观察，3个组别病毒上清液的病毒滴度亦无明显差异（P>0.05）。结果表明，源于大肠杆菌BL21（DE3）表达系统和毕赤酵母（X-33）表达系统的重组胰蛋白酶，均可替代猪源性胰蛋白酶，用于乙型脑炎减毒活疫苗的制备。

关键词: 乙脑疫苗, 猪源胰酶, 重组胰蛋白酶, 细胞消化

Abstract:

To explore the feasibility of using recombinant trypsin as a substitute for porcine derived trypsin in the preparation of attenuated Japanese encephalitis live vaccine， porcine derived trypsin， recombinant trypsin derived from Escherichia coli BL21 （DE3） expression system， and recombinant trypsin derived from Pichia pastoris （X-33） expression system were used to digest primary hamster kidney blocks at the same enzyme activity （total enzyme activity 315 200 U）， with the same digestion temperature and time in each group. The results showed that after digestion with three types of pancreatic enzymes， the cell dispersion effect and growth status were good， and there was no significant difference in the cell spreading rate on the third day of cultivation （P>0.05）. During the virus culture stage， there was no significant difference in virus titers among the three groups of virus supernatants （P>0.05）. The results showed that recombinant trypsin derived from E. coli BL21 （DE3） expression system and Pichia pastoris （X-33） expression system can replace porcine trypsin in the preparation of attenuated live Japanese encephalitis vaccine.

Key words: Japanese encephalitis vaccine, porcine pancreatic enzyme, recombinant trypsin, cellular digestion

中图分类号:

Q789

乔建, 曾帅, 张杨, 徐葛林. 重组胰蛋白酶在原代地鼠肾细胞组织分离中的应用[J]. 生物技术进展, 2025, 15(1): 152-157.

Jian QIAO, Shuai ZENG, Yang ZHANG, Gelin XU. Application of Recombinant Trypsin in Tissue Isolation of Primary Hamster Kidney Cells[J]. Current Biotechnology, 2025, 15(1): 152-157.

图/表 3

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实验分组	胰蛋白酶	厂家	酶活性检验结果/（U·mg^-1）	工作浓度/（mg·mL^-1）	工作浓度下的总酶活力/U
A组	猪源胰蛋白酶	GIBCO	788	1.000	315 200
B组	重组胰蛋白酶[大肠杆菌BL21(DE3)]	上海雅心	6 169	0.128	315 200
C组	重组胰蛋白酶（毕赤酵母X-33）	珠海翼百康	4 606	0.171	315 200

实验分组	胰蛋白酶	厂家	酶活性检验结果/（U·mg^-1）	工作浓度/（mg·mL^-1）	工作浓度下的总酶活力/U
A组	猪源胰蛋白酶	GIBCO	788	1.000	315 200
B组	重组胰蛋白酶[大肠杆菌BL21(DE3)]	上海雅心	6 169	0.128	315 200
C组	重组胰蛋白酶（毕赤酵母X-33）	珠海翼百康	4 606	0.171	315 200

因变量	分组	平均值±标准差
消化液消化前pH	A	7.57±0.05a
	B	7.60±0.02a
	C	7.59±0.05a
消化液消化后pH	A	7.31±0.05a
	B	7.35±0.04a
	C	7.33±0.04a
分散后单瓶成团细胞数/个	A	1.92E+07±1.67E+06a
	B	1.75E+07±2.50E+06a
	C	1.25E+07±5.00E+06a
分散后单瓶单个细胞数/个	A	3.92E+07±5.20E+06a
	B	4.08E+07±7.64E+06a
	C	4.25E+07±6.61E+06a
分散后单瓶细胞总数/个	A	6.34E+07±1.13E+07a
	B	5.84E+07±1.01E+07a
	C	5.50E+07±7.43E+06a
单瓶单个细胞占比/%	A	67.00%±4.73%a
	B	69.88%±1.25%a
	C	77.46%±8.36%a
培养第三天的单瓶细胞铺展率/%	A	92.33%±2.52%a
	B	95.67%±1.16%a
	C	95.00%±3.00%a
培养第三天的单瓶细胞总数/个	A	3.60E+08±2.73E+07a
	B	3.93E+08±3.52E+07a
	C	4.15E+08±3.36E+07a
病毒滴度/(lgPFU·mL^-1)	A	7.33±0.06a
	B	7.47±0.06a
	C	7.40±0.10a

因变量	分组	平均值±标准差
消化液消化前pH	A	7.57±0.05a
	B	7.60±0.02a
	C	7.59±0.05a
消化液消化后pH	A	7.31±0.05a
	B	7.35±0.04a
	C	7.33±0.04a
分散后单瓶成团细胞数/个	A	1.92E+07±1.67E+06a
	B	1.75E+07±2.50E+06a
	C	1.25E+07±5.00E+06a
分散后单瓶单个细胞数/个	A	3.92E+07±5.20E+06a
	B	4.08E+07±7.64E+06a
	C	4.25E+07±6.61E+06a
分散后单瓶细胞总数/个	A	6.34E+07±1.13E+07a
	B	5.84E+07±1.01E+07a
	C	5.50E+07±7.43E+06a
单瓶单个细胞占比/%	A	67.00%±4.73%a
	B	69.88%±1.25%a
	C	77.46%±8.36%a
培养第三天的单瓶细胞铺展率/%	A	92.33%±2.52%a
	B	95.67%±1.16%a
	C	95.00%±3.00%a
培养第三天的单瓶细胞总数/个	A	3.60E+08±2.73E+07a
	B	3.93E+08±3.52E+07a
	C	4.15E+08±3.36E+07a
病毒滴度/(lgPFU·mL^-1)	A	7.33±0.06a
	B	7.47±0.06a
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重组胰蛋白酶在原代地鼠肾细胞组织分离中的应用

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