本期目录
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生物技术进展
2012年 第2卷 第4期
发布日期：2012-07-25
进展评述
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理性设计提高蛋白质热稳定性的研究进展
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田健, 王平, 伍宁丰, 范云六
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2012 Vol. 2 (4):
233-239.
DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2012.04.01
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摘要 (
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通过理性设计提高蛋白质的热稳定性一直是当今计算生物学及蛋白质工程领域中的一个研究热点。与传统的定向进化的方法相比,该方法具有目的性强、效率高的优点,对扩大蛋白质的应用范围与探究蛋白质结构和功能的关系均具有重要意义。本文详细介绍了影响蛋白质热稳定性的因素,以及一些常用的通过理性设计来提高蛋白质的热稳定性的策略。由于影响蛋白质热稳定性的因素众多,并且众多因素之间还具有千丝万缕的联系,到目前为止研究人员还没有提出一个公认的适合于所有蛋白质的理性设计的策略,这也是现代计算生物学家及蛋白质工程学家们努力研究的一个重要方向。
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抗旱相关基因在烟草中的应用研究进展
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赵文军, 杨继周, 胡保文, 常剑
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2012 Vol. 2 (4):
240-248.
DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2012.04.02
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摘要 (
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干旱是影响烟草正常生长、发育、产量和烟叶品质的一个重要逆境因子。在干旱胁迫下,植物体内会通过激发一些抗旱基因的表达来增强植物的抗旱能力。目前,很多抗旱相关的功能蛋白基因和调控蛋白基因已被克隆并在烟草中实现了遗传转化,外源抗旱基因的表达提高了转基因烟草的抗旱能力。抗旱基因的克隆为烟草抗旱新品种的培育奠定了良好的分子基础,系统深入地研究抗旱相关基因在干旱胁迫条件下的表达与调控,可为通过基因工程手段提高烟草的抗旱能力开辟新途径,同时也能为其他农作物的抗旱分子育种和品种改良提供基因资源。
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转基因RNAi技术在动物抗病毒育种中的应用
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叶明强,邝哲师,赵祥杰,吴福泉,李庆荣,肖阳,罗国庆
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2012 Vol. 2 (4):
249-254.
DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2012.04.03
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摘要 (
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病毒对动物和人类健康都是极大的威胁,抗病毒疫苗虽然能在一定程度上预防病毒病,但目前几乎还不能对变异的传染病进行抗病毒治疗。尽管RNA干扰研究到目前才短短十几年,其作用机理已基本清楚。RNAi能够非常有效的抑制病毒体内复制,其介导的抗病转基因动物的研究相继取得了阶段性进展,抗疯牛病转基因羊和牛,抗内源性逆转录病毒猪以及抗核型多角体病毒病的转基因家蚕已经成功获得。尽管如此,目前的研究主要还是集中在细胞水平及小鼠模型方面,获得的转基因动物种类和数量有限,但为培育动物抗病毒品种提供了理论依据和技术支撑。随着转基因技术的不断的进步和成熟, RNA干扰技术将成为动物抗病毒育种中最有应用前景的方法之一。
研究论文
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基于ITS序列分析对海南普通野生稻籼粳分化的研究
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尹昭坤, 廖承红, 徐立新, 裴新梧, 袁潜华
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2012 Vol. 2 (4):
270-275.
DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2012.04.06
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摘要 (
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对海南普通野生稻的18个居群分别进行ITS序列克隆和测序,研究海南普通野生稻居群的籼粳分化。结果表明,海南普通野生稻的ITS序列居群间差异性显著,ITS1长度为163~239 bp,G+C含量变化范围为53.5%~77-2%。ITS2长度为165~243 bp,G+C含量变化范围为54.5%~74.2%。ITS1和ITS2区简约信息位点分别为108个和145个,单一信息位点分别为7个和2个。InDel(插入/缺失)位点分别为133个和145个,发现了9个ITS籼粳特异性位点。ClustalX软件排序及Mega构树结果表明,海南普通野生稻存在籼粳分化,偏籼型有10个居群,偏粳型有8个居群。本研究有助于揭示海南普通野生稻在起源演化上的地位,并为有效利用海南优良野生稻种质资源提供理论依据。
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两种三叶草萌发期和幼苗期抗性的比较研究
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刘晓珊
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2012 Vol. 2 (4):
276-281.
DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2012.04.07
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摘要 (
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通过测定不同的温度、水分、盐分和光照等条件下，杂三叶和地三叶(考拉)在萌发期和幼苗期的发芽率、发芽势、生长速度、叶绿素含量、组织含水量、脯氨酸含量和细胞膜透性等指标，对两者抗性进行了比较研究。结果表明，在不同盐分浓度处理下，三叶草的叶绿素含量随盐浓度的增加而降低，组织含水量变化不明显，游离脯氨酸含量随盐浓度的增加而增加，细胞膜透性随盐浓度的增加而增强；在不同水分条件处理下，三叶草的游离脯氨酸含量和细胞膜透性随水分的增加而增加，叶绿素含量和组织含水量均变化不明显；在不同光照时间处理下，三叶草的叶绿素含量和游离脯氨酸含量均变化不明显，其细胞膜透性也无较大改变，而组织含水量则随光照时间的增加而增加;在不同温度条件下处理，三叶草的叶绿素含量、组织含水量和游离脯氨酸含量均变化不明显，细胞膜透性随温度的升高而降低。另外，从各项测定结果可以看出，杂三叶的各项性状要强于地三叶。
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猪流行性腹泻病毒S基因片段的克隆及原核表达
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王树坤, 郎洪武, 李轶女, 陈晓春, 张志芳
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2012 Vol. 2 (4):
282-287.
DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2012.04.08
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摘要 (
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为研究猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus PEDV)S基因片段的原核表达产物是否具有抗原性,分析S基因抗原位点后,用PCR技术扩增S蛋白主要抗原区的核酸序列,经克隆后将目的片段连接到原核表达载体pET-28a(+)中,成功构建了重组质粒pET-28a-PEDV-Sp,其重组菌于37℃、0.5 mmol/L IPTG诱导表达4 h后进行SDS-PAGE分析,在分子质量约为29 kDa处出现一新蛋白带,与预期相符。质谱鉴定表明,已成功表达了目的蛋白。纯化后的重组蛋白免疫兔制备多克隆抗体,抗体效价检测结果显示该蛋白具有良好的抗原性。该研究为猪流行性腹泻基因工程疫苗的研制奠定基础。
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离子交换法提取大枣中环磷酸腺苷(cAMP)的工艺研究
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夏泉鸣,周洋,赵黎明,周家春,蒋丽华,赵鹤飞
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2012 Vol. 2 (4):
288-292.
DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2012.04.09
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摘要 (
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环磷酸腺苷(cAMP)作为第二信使参与多种生理生化过程的调节,是人体内重要的生理活性物质。本文采用水浸提和6 000 Da超滤膜过滤方法对大枣进行预处理,从5种树脂中选型最合适的树脂,并对提取工艺进行确定。结果表明,大枣在小颗粒状(0.3 cm)捣碎状态下,60℃水浸提12 h,cAMP提取效果最好。通过考察SD5、SD8、D01、D05和D13五种型号离子交换树脂,发现D13型树脂提取大枣中cAMP效果最佳。选用的洗脱剂为0.05 mol/L HCl,流速为1.5 mL/min。得到产品产率为65.0%,其中cAMP含量37.5%。
技术与方法
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一种简便高效的酵母基因组提取方法
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唐巧玲, 付鹏飞, 王旭静, 王志兴
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2012 Vol. 2 (4):
293-296.
DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2012.04.10
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摘要 (
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提取基因组进行检测是酵母研究过程中的必要步骤之一。以毕赤酵母菌株GS115作为研究对象,主要成分为0.2 mol/L醋酸锂和1% SDS的酵母裂解液能高效的裂解酵母细胞壁。与两种酵母基因组提取试剂盒相比,该方法从相同体积的酵母培养液中获得的基因组的量高5倍以上,并且操作简便、快速,能在2 h内完成一次提取过程,极大地缩短了时间。以GS115中的内源AOX基因为目的基因,对提取的基因组进行PCR检测和Southern杂交检测,进一步验证了基因组的质量。因此,本文建立了一种简便、快速、经济而高效的酵母基因提取方法。
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