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• 生物技术进展
  2013年 第3卷 第4期 发布日期：2013-07-25

进展评述

• 着丝粒及其在减数分裂中的作用研究进展
• 张峰,林娟,赵军
• 2013 Vol. 3 (4): 233-237. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2013.04.01
• 摘要 ( ) PDF (1673KB)( )
• 着丝粒作为真核生物染色体的重要结构之一，是有丝分裂和减数分裂过程中重要的功能元件，其所起到的重要作用越来越受到人们的重视。在整个真核生物类群中，尽管不同物种之间着丝粒的DNA序列相差极大，但是其功能却是相当保守，这确保了着丝粒在调控细胞分裂和染色单体分离过程中能够正常行使其功能，除此之外，人们还发现着丝粒蛋白不仅在细胞的有丝分裂中起作用，还在减数分裂中起着重要的作用。

• eds1、atr/nrc1、ahl19三个抗病相关的防卫基因的研究进展
• 齐希梁,程红梅
• 2013 Vol. 3 (4): 238-22. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2013.04.02
• 摘要 ( ) PDF (1432KB)( )
• 防卫基因在植物抗病分子生物学的的研究中起到重要的作用。本文综述了抗病相关基因eds1、atr/nrc1、ahl19在防卫病原微生物入侵时的机理及在信号通路中的作用。EDS1 是依赖水杨酸的抗性途径TIR-NB-LRR类R蛋白防御中的一个必需的基本元件；AHL19是防卫病原菌入侵时是一个关键的调控元件，防卫病原菌入侵的信号通路还有待探索；NRC1是HR关联的细胞程序性死亡的抗性蛋白Cf-9、Pto和Rx途径中的必需因子。这些基因的研究有助于植物抗病分子育种研究, 尤其是针对缺少抗原的重大病害（如棉花黄萎病）提供了获得转基因新品种的可能性。

• 谷子诱变育种研究现状
• 张文兴,赵晋锋
• 2013 Vol. 3 (4): 243-247. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2013.04.03
• 摘要 ( ) PDF (1164KB)( )
• 诱变育种是新发展的一项现代育种技术，也是常规选择育种和杂交育种的重要补充。诱变育种技术在谷子中应用较少，本文对谷子上应用的甲基磺酸乙酯（EMS）、硫酸二乙酯（DES）等化学诱变以及离子束注入、射线处理、空间诱变等物理诱变技术的诱变机理、生物效应进行了详细介绍。分析了目前谷子诱变技术的研究应用现状及存在问题，并且对今后谷子诱变育种技术重点研究发展方向与领域进行了展望。

研究论文

• 利用多重PCR-SSR标记鉴别三系杂交棉种子混杂和SSR位点杂合
• 马维军,任爱民,尹国,张玉娟,韩秋成,崔明晖
• 2013 Vol. 3 (4): 248-251. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2013.04.04
• 摘要 ( ) PDF (2956KB)( )
• 杂交种纯度优劣直接决定了杂交种产量，而常规方法鉴定周期长，不能及时反映杂交种纯度，难以指导生产应用。由于种子混杂和SSR位点杂合都会造成株间带型的差异，为提高杂交种纯度鉴定的准确性，本研究从196对SSR引物中筛选到4对在双亲间表现稳定多态性的引物，根据带型特点进行组合，结果显示，利用多重PCR-SSR技术可以区分棉花杂交种种子混杂和SSR位点杂合，为杂交种快速准确鉴定提供技术支持。

• 猪α干扰素在家蚕中表达及其抗病毒活性测定
• 钟鲁龙,易咏竹,丁农,张金卫,柳纪省
• 2013 Vol. 3 (4): 252-256. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2013.04.05
• 摘要 ( ) PDF (2493KB)( )
• 本研究利用家蚕杆状病毒表达系统在家蚕中表达猪α干扰素。首先优化并合成猪α干扰素基因，将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393的多角体基因启动子下游，与线性化的Bm-BacPAK6 DNA共转染至Bm-N细胞，在细胞内进行同源重组后，纯化得到重组病毒。Western杂交结果显示，在蚕血淋巴中可检测到猪α干扰素表达。用微量细胞病变抑制法在Vero/VSV*GFP系统上进行干扰素活性测定，结果表明重组猪α干扰素有抗病毒活性，效价达到106 U/mL以上，证明在家蚕幼虫体内成功表达了有活性的猪α干扰素。

• 苏云金芽胞杆菌中aiiA基因密码子偏好性分析
• 曾世涌,苏小惠,谢盼盼,毛惠民,杨梅
• 2013 Vol. 3 (4): 257-263. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2013.0 .
• 摘要 ( ) PDF (4606KB)( )
• aiiA基因指导表达的AiiA蛋白是一类能水解细菌群体感应信号分子内酯键的内酯酶。本研究使用CodonW、CUSP和CHIPS等相关程序对苏云金芽胞杆菌中aiiA基因的密码子使用情况进行分析，比较了aiiA基因与大肠杆菌、苏云金芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌以及毕赤酵母的密码子偏好性。结果表明，aiiA基因偏好使用以A、T结尾的密码子；aiiA基因的密码子用法与大肠杆菌、苏云金芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌和毕赤酵母的基因组密码子用法都有不同程度的偏好差异，其中与毕赤酵母的密码子用法差异最大；比较了aiiA基因分别以苏云金芽胞杆菌、大肠杆菌、枯草芽胞杆菌及毕赤酵母为宿主时密码子使用频率，发现都含有不同程度的低频密码子聚集现象，如果要在上述几种表达系统中实现aiiA基因的高效表达则需对aiiA基因的部分密码子进行优化改造。

• 一株普鲁兰酶产生菌的筛选及其基因克隆和酶学特性研究
• 王培立,初晓宇,伍宁丰
• 2013 Vol. 3 (4): 264-269. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2013.04.07
• 摘要 ( ) PDF (2183KB)( )
• 普鲁兰酶作为一种解支酶，能够特异地作用于多糖中的α-1,6糖苷键，将淀粉中高度分支的支链淀粉转变成直链淀粉。本文通过以普鲁兰糖为唯一碳源的功能平板筛选方法，从云南腾冲温泉淤泥中分离到1株产普鲁兰酶的菌株73号，经16S rDNA序列分析，该菌属于厌氧芽胞杆菌属（Anoxybacillus sp.）。通过普鲁兰酶的保守区片段扩增及序列比对，最终从该菌中克隆得到普鲁兰酶编码基因pul73，全长2 121 bp，编码706个氨基酸。将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中进行异源表达和纯化，获得酶蛋白Pul73最适温度50℃，最适pH 6.0，在65℃有较好的热稳定性，保温30 min后仍有72%的剩余酶活。50℃时Pul73对普鲁兰糖的K_m为1.643 mg/mL，其最大反应速度V_max为1.34 U/mg，k_cat为535.8/s。

• 木霉W2固态发酵产羧甲基纤维素酶的研究
• 任红梅,刘左军,伍国强,单夕文
• 2013 Vol. 3 (4): 270-276. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2013.0 .
• 摘要 ( ) PDF (2544KB)( )
• 从湖北地区棉花地采样，筛选分离出一株纤维素分解菌株W2，根据形态及18S rDNA序列分析，初步鉴定为木霉属。以玉米芯为发酵原料，对W2固态发酵(SSF)产羧甲基纤维素酶（CMCase）的条件进行优化。选取发酵时间、温度、基质含水量和初始pH为自变量，以CMCase活力为响应值，采用BoxBenhnken中心组合设计和响应面分析法，研究了各变量及其交互作用对CMcase的影响，建立了二次多项式回归方程及响应面图。结合单因素试验，确定了适宜的发酵条件为：温度25℃，基质含水量63%，初始pH 6.0，发酵65 h，CMCase活力达到最大。最后，在适宜的固态发酵曲中，加入活化酵母细胞，采用改良Conway法测定发酵曲中酒精的含量，达0.38 mg/mL。

• 纳豆激酶生产菌株分离筛选与热稳定性分析
• 赵仲麟,李淑英,聂莹,袁超,李燕,唐选明
• 2013 Vol. 3 (4): 277-280. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2013.0 .
• 摘要 ( ) PDF (1176KB)( )
• 以日本纳豆菌为对照，从我国黑豆豆豉中筛选到一株纳豆激酶生产菌株BSNK-5，其发酵液相对于尿激酶的活性为509.64 IU/mL，比相同培养条件下对照菌株的酶活提高了83.87%；BSNK-5发酵生产纳豆周期短，颜色金黄，具有酱香味；该菌株合成的纳豆激酶具有较好的热稳定性，70℃处理20 min仍保留约10%的活性,具有极大的市场应用潜力。

• 新疆阿克苏盐碱地土壤细菌的分离研究
• 李良秋,郑贺云,蔡卓平,姚青,朱红惠
• 2013 Vol. 3 (4): 281-287. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2013.04.10
• 摘要 ( ) PDF (2018KB)( )
• 为从可培养层面了解新疆塔里木盆地盐碱地土壤中的细菌资源多样性，本研究共分离和培养盐碱地土壤中的细菌103株。16S rDNA基因序列系统发育分析表明，这些株菌分别属于芽胞杆菌属（Bacillus）等31个属。盐碱地土壤环境中的优势菌群是Bacillus, Streptomyces, Micrococcus, Kocuria和Paracoccus,分别占总菌株数的36.27%、10.8%、6.9%、6.9%和3.9%。其中5株菌的16S rDNA基因序列与已有效发表菌株的序列相似性小于97%,表明它们可能是新的细菌分类单元。研究表明新疆阿克苏地区盐碱地土壤中具有丰富的微生物资源,为盐碱地微生物资源的开发提供重要的理论依据。

• 一株耐盐粘细菌的分离与鉴定
• 张鲜姣,谢小林,陈美标,段锦梅,李燕璇,朱红惠
• 2013 Vol. 3 (4): 288-292. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2013.04.11
• 摘要 ( ) PDF (3264KB)( )
• 采用传统的子实体转接法和反复纯化法，从新疆阿克苏地区盐碱地土壤样品中分离1株粘细菌，经过对其菌落、子实体、营养细胞、粘孢子大小形态观察、生理生化特征试验及16S rDNA序列分析，鉴定菌株5x1为大孢珊瑚球菌（Corallococcus macrosporus），在对其进行耐盐性分析时发现，菌株5x1能耐受NaCl的浓度为2%。结果表明：菌株5x1为陆生耐盐粘细菌。

技术与方法

• 蛋白药物生产中支原体检测方法的建立及应用
• 刘素霞,刘晓志,杨立霞,赵伟,常亮,周兴军,高健
• 2013 Vol. 3 (4): 293-296. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2013.0 .
• 摘要 ( ) PDF (1766KB)( )
• 为检测中国仓鼠卵巢细胞（CHO） 细胞培养过程中的支原体污染，以CHO细胞的管家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶作为内参基因，将内参引物和支原体引物同时放置在一个PCR体系中，确立了一种快速、准确、稳定的PCR检测方法。通过优化两种引物的浓度配比，确定内参基因引物浓度为5μmol/L，支原体引物浓度为10μmol/L。与DNA荧光染色法相比，PCR法检测结果一致，减少了假阴性结果，缩短了检测时间，可以满足生产过程中的支原体污染的监测。

• F₀F₁-ATPase分子马达技术对阪崎肠杆菌检测的研究
• 张捷,王煜,陆琳,刘艳华,周琦,孙梓晏,顾德周,尚世进,张惠媛,王佩荣,陈广全,乐加昌
• 2013 Vol. 3 (4): 297-300. DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2013.0 .
• 摘要 ( ) PDF (1391KB)( )
• 本研究建立了应用F₀F₁-ATPase分子马达生物传感器快速检测阪崎肠杆菌的方法。自嗜热菌中提取载色体后，合成针对阪崎肠杆菌的生物素化ITS探针，在载色体ATP合酶的ε亚基上连接ε亚基抗体-生物素-链霉亲和素-生物素-ITS探针，将待测阪崎肠杆菌标准菌株和阴性对照分别与此生物传感器结合，比较其催化ATP产生量，进而对阪崎肠杆菌DNA进行检测。结果表明，chro ITS探针浓度0.019 mg/mL，阪崎肠杆菌DNA浓度40 ng/mL为最适检测条件。通过与传统检测方法及PCR检测方法对照，本方法具有良好的检测符合性。