T淋巴细胞亚群CD4+比例标准物质的研制

doi:10.19586/j.2095-2341.2022.0012

生物技术进展 ›› 2022, Vol. 12 ›› Issue (4): 600-605.DOI: 10.19586/j.2095-2341.2022.0012

T淋巴细胞亚群CD4⁺比例标准物质的研制

李妍(), 杨镇州, 梁文()

上海市计量测试技术研究院化学与电离辐射所，国家市场监管重点实验室（生物分析计量溯源），上海 201203

收稿日期:2022-02-10 接受日期:2022-04-02 出版日期:2022-07-25 发布日期:2022-08-10
通讯作者: 梁文
作者简介:李妍 E-mail: liyan@simt.com.cn；
基金资助:
国家重点研发计划项目国家质量基础设施体系重点专项(2021YFF0600901)

Development of Subsets CD4⁺ Proportion of T Lymphocyte Standard Reference Materials

Yan LI(), Zhenzhou YANG, Wen LIANG()

State Key Laboratory of Market Regulation （Bioanalytical Metrology Traceability），Division of Chemistry and Ionizing Radiation Measurement Technology，Shanghai Institute of Measurement and Testing Technology，Shanghai 201203，China

Received:2022-02-10 Accepted:2022-04-02 Online:2022-07-25 Published:2022-08-10
Contact: Wen LIANG

摘要/Abstract

摘要：

CD4⁺ T细胞的减少常见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷症、艾滋病等。检测实验室常需要对CD4⁺ T细胞检测能力进行质控，急需有准确CD4⁺比例量值的T淋巴细胞标准物质。将人工制备的T淋巴细胞进行纯化后，使用流式细胞术进行标准物质候选物的均匀性检验、稳定性检验。联合8家检测实验室采用流式细胞微球计数法对标准物质候选物进行协同定值。实验数据统计表明，该标准物质候选物的均匀性好，并且在-20 ℃储存条件下可稳定12个月以上，其标准量值CD4⁺比例为74.0%±6.7%（k=2）。该标准物质适用于流式细胞仪中CD4⁺细胞占总淋巴细胞的百分比项目的计量校准，以及流式细胞术检测过程的方法验证和检测结果的质量控制。

关键词: T淋巴细胞, 标准物质, 流式细胞术

Abstract:

The reduction of CD4 positive （CD4⁺）^{T cells is commonly happened along with malignant tumors， hereditary immunodeficiency， AIDS， etc. To verify the detection capability of CD4⁺ T cells， it becomes an urgent need to develop a reference material （RM） of CD4⁺ T lymphocyte subset， which has definite CD4⁺ proportion value. We prepared the candidate reference materials and performed the uniformity test and stability monitoring. The proportion of CD4⁺ cells was quantified by 8 laboratories. The good test results showed that the homogeneity of the reference material is stable for more than 12 months storage under -20 ℃. The CD4⁺ standard rate was 74.0%±6.7%（k=2）. The candidate reference material is adaptable for the metrological calibration of flow cytometry， the method validation of flow cytometry detection process and the quality control of detection results.}

Key words: T lymphocyte, standard reference material, flow cytometry

中图分类号:

Q813

李妍, 杨镇州, 梁文. T淋巴细胞亚群CD4⁺比例标准物质的研制[J]. 生物技术进展, 2022, 12(4): 600-605.

Yan LI, Zhenzhou YANG, Wen LIANG. Development of Subsets CD4⁺ Proportion of T Lymphocyte Standard Reference Materials[J]. Current Biotechnology, 2022, 12(4): 600-605.

图/表 5

图1 细胞分选纯化前后的流式细胞检测散点图A：未纯化的PBMC细胞，其中FITC-CD4+比例为28.1%；B：纯化后的T淋巴细胞，其中FITC-CD4+比例为74.2%

Fig.1 Flow cytometry scatter plot before and after cell sorting and purification

表1 标准物质的长期稳定性统计结果

Table 1 Long-term stability test results of reference materials

保存条件	-20 ℃保存12个月	4 ℃保存3个月
结论	稳定	稳定
斜率 $b 1$	-0.012	-0.808
截距 $b 0$	73.624	73.740
$s (b 1)$	0.028	0.601
$t 0.95,7 ⋅ s (b 1)$	0.053	2.586

表1 标准物质的长期稳定性统计结果

Table 1 Long-term stability test results of reference materials

保存条件	-20 ℃保存12个月	4 ℃保存3个月
结论	稳定	稳定
斜率 $b 1$	-0.012	-0.808
截距 $b 0$	73.624	73.740
$s (b 1)$	0.028	0.601
$t 0.95,7 ⋅ s (b 1)$	0.053	2.586

图2 标准物质在-20 ℃和4 ℃温度下保存3个月的流式细胞仪检测结果

Fig.2 Flow cytometry results of standard materials stored at -20 ℃ and 4 ℃ for 3 months

表2 标准物质的8家单位定值数据

Table 2 Quantified test results of reference materials by 8 laboratories

定值单位	CD4⁺细胞比例/%								平均值/%	标准误差/%
1	75.50	74.06	72.51	74.18	73.69	72.56	73.94	74.10	73.8	1.30
2	74.90	73.70	73.30	74.20	75.10	74.00	74.40	73.70	74.2	0.83
3	73.50	72.90	74.40	74.00	74.70	74.80	73.20	73.60	73.9	0.95
4	74.03	74.38	73.89	74.99	73.98	74.49	74.93	74.58	74.4	0.57
5	74.30	73.90	73.60	74.00	73.70	72.60	74.40	73.50	73.8	0.76
6	74.40	74.20	72.70	73.60	73.50	72.90	73.80	73.70	73.6	0.79
7	73.77	73.68	74.30	73.96	74.03	72.85	73.43	73.50	73.7	0.60
8	74.80	74.50	74.00	74.40	73.40	73.50	75.20	74.00	74.2	0.84

表3 标准物质的不确定度分量

Table.3 Uncertainty component of reference materials

不确定度分量	数值
均匀性引起的不确定度 $u r e l (b b)$	0.006 6
稳定性引起的不确定 $u s$	0.005
定值过程统计因素引入的不确定 $u c h a r 1$	0.002 8
定值过程非统计因素引入的不确定 $u c h a r 2$	0.044
合成相对扩展标准不确定 $u r e l$	0.09

表3 标准物质的不确定度分量

Table.3 Uncertainty component of reference materials

不确定度分量	数值
均匀性引起的不确定度 $u r e l (b b)$	0.006 6
稳定性引起的不确定 $u s$	0.005
定值过程统计因素引入的不确定 $u c h a r 1$	0.002 8
定值过程非统计因素引入的不确定 $u c h a r 2$	0.044
合成相对扩展标准不确定 $u r e l$	0.09

参考文献 12

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10	国家食品药品监督管理总局. 流式细胞仪 [S]. 北京:中国标准出版社, 2017.
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