长链非编码RNA ZFAS1在结直肠癌中的表达及生物学功能

doi:10.19586/j.2095-2341.2022.0035

生物技术进展 ›› 2022, Vol. 12 ›› Issue (3): 427-435.DOI: 10.19586/j.2095-2341.2022.0035

长链非编码RNA ZFAS1在结直肠癌中的表达及生物学功能

武丽娜¹(), 彭小忠², 鲁重美¹()

^1.中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院消化内科，北京 100730
^2.中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所，医学分子生物学国家重点实验室，北京 100730

收稿日期:2022-03-16 接受日期:2022-04-06 出版日期:2022-05-25 发布日期:2022-05-26
通讯作者: 鲁重美
作者简介:武丽娜 E-mail：w4932965@163.com；

Expression and Biological Function of Long Noncoding RNA ZFAS1 in Colorectal Cancer

Lina WU¹(), Xiaozhong PENG², Chongmei LU¹()

^1.Department of Gastroenterology，Peking Union Medical College Hospital，Peking Union Medical College，Chinese Academy of Medical Sciences，Beijing 100730，China
^2.State Key Laboratory of Medical Molecular Biology，Institute of Basic Medical Sciences，Peking Union Medical College，Chinese Academy of Medical Sciences，Beijing 100730，China

Received:2022-03-16 Accepted:2022-04-06 Online:2022-05-25 Published:2022-05-26
Contact: Chongmei LU

摘要/Abstract

摘要：

为探讨长链非编码RNA锌指核转录因子反义链1（zinc finger nuclear transcription factor antisense RNA 1，ZFAS1）在结直肠癌中的表达及生物学功能，通过实时荧光定量PCR检测ZFAS1在结直肠癌中的表达水平，并分析其表达水平与患者临床病理特征之间的关系。利用细胞功能学试验检测ZFAS1对结肠癌细胞生长及迁移能力的影响，敲低ZFAS1，检测其潜在靶基因锌指核转录因子1（zinc finger nuclear transcription factor X-box binding 1-type containing 1，ZNFX1）在结肠癌细胞系中的表达量，并通过细胞功能学试验检测ZNFX1对结肠癌细胞生长及迁移能力的影响。结果显示，ZFAS1在结直肠癌细胞中高表达，敲低ZFAS1可以抑制结肠癌细胞的生长及迁移；敲低ZFAS1后，ZNFX1的表达上调；ZNFX1在结肠癌细胞系中低表达，过表达ZNFX1可以抑制结肠癌细胞的生长及迁移能力。研究结果为阐明ZFAS1在结直肠癌中的作用机制奠定了一定的理论基础。

关键词: 长链非编码RNA, 结直肠癌, ZFAS1, ZNFX1

Abstract:

To explore the expression and biological function of long noncoding RNA （lncRNA） zinc finger nuclear transcription factor antisense RNA 1 （ZFAS1） in colorectal cancer， the expression level of ZFAS1 in colorectal cancer were detected by real-time PCR， and the relationship between its expression level and clinicopathological features was analyzed. The effect of ZFAS1 on the growth and migration of colorectal cancer cells was detected by cell function experiment. By knockdown of ZFAS1， the expression of its potential target gene zinc finger nuclear transcription factor 1 （ZNFX1） in colorectal cancer cell lines were delected. The effect of ZNFX1 on the growth and migration of colon cancer cells was detected by cell function experiment. The results showed that， ZFAS1 was highly expressed in colorectal cancer， and knockdown of ZFAS1 could inhibit the growth and migration of colorectal cancer cells. After knockdown of ZFAS1， ZNFX1 expression was up-regulated. ZNFX1 was lowly expressed in colorectal cancer cell lines. Overexpression of ZNFX1 could inhibit the growth and migration of colorectal cancer cells. The results of this study laid a theoretical foundation for clarifying the mechanism of ZFAS1 in colorectal cancer.

Key words: long noncoding RNA, colorectal cancer, ZFAS1, ZNFX1

中图分类号:

R735.34

武丽娜, 彭小忠, 鲁重美. 长链非编码RNA ZFAS1在结直肠癌中的表达及生物学功能[J]. 生物技术进展, 2022, 12(3): 427-435.

Lina WU, Xiaozhong PENG, Chongmei LU. Expression and Biological Function of Long Noncoding RNA ZFAS1 in Colorectal Cancer[J]. Current Biotechnology, 2022, 12(3): 427-435.

图/表 7

表1 ZFAS1和ZNFX1的real?time PCR引物

Table 1 The real?time PCR primers of ZFAS1and ZNFX1

引物名称	序列（5'→3'）
ZFAS1⁃F	5'⁃CCACGTGTACCAGTGTGTGT⁃3'
ZFAS1⁃R	5'⁃CATTCTTGAAGTGGGCACAGC⁃3'
ZNFX1⁃F	5'⁃CCTTGCAGTTTGCTCTCACA⁃3'
ZNFX1⁃R	5'⁃AGATGGGGAACTTCTGGAGG⁃3'
GAPDH⁃F	5'⁃CATCCATGACAACTTTGGTATC⁃3'
GAPDH⁃R	5'⁃CCATCACGCCACAGTTTC⁃3'

表2 siRNA序列

Table 2 The sequences of siRNA

名称	序列（5'-3'）
ZFAS1 siRNA⁃1⁃F	5'⁃CACGUGCAGACAUCUACAATT⁃3'
ZFAS1 siRNA⁃1⁃R	5'⁃UUGUAGAUGUCUGCACGUGTT⁃3'
ZFAS1 siRNA⁃2⁃F	5'⁃GGGUGUUGGAAGUAGAAUATT⁃3'
ZFAS1 siRNA⁃2⁃R	5'⁃UAUUCUACUUCCAACACCCTT⁃3'
control siRNA⁃F	5'⁃UUCUCCGAACGUGUCACGUTT⁃3'
control siRNA⁃R	5'⁃ACGUGACACGUUCGGAGAATT⁃3'

图1 ZFAS1在结肠癌细胞系和结直肠癌组织中的表达水平A：ZFAS1在结肠癌细胞系及结肠上皮细胞系的相对表达水平，CCD841CoN—正常结肠上皮细胞系；B：ZFAS1在结直肠癌组织及癌旁正常组织的相对表达水平。“*”表示与CCD841CoN或癌旁正常组织比较，差异在P<0.05水平有统计学意义。

Fig. 1 The expression levels of ZFAS1in colorectal cancer cell lines and colorectal cancer tissues

表3 ZFAS1的表达与结直肠癌患者的临床病理资料的相关性 (n(%))

Table 3 Correlation between ZFAS1and clinicopathological data of colorectal cancer patients

临床病理资料	总例数	组别		P值
临床病理资料	总例数	低水平组	高水平组	P值
性别				0.627
男	37（55.2）	17（25.4）	20（29.8）
女	30（44.8）	16（23.9）	14（20.9）
年龄/岁				0.796
<60	22（32.8）	10（14.9）	12（17.9）
≥60	45（67.2）	23（34.3）	22（32.9）
血清癌胚抗原/（ng·mL^-1）				0.806
<5	39（58.2）	20（29.9）	19（28.3）
≥5	28（41.8）	13（19.4）	15（22.4）
肿瘤部位				0.807
结肠	38（56.7）	18（26.9）	20（29.8）
直肠	29（43.3）	15（22.4）	14（20.9）
肿瘤大小/cm				0.544
<5	35（52.2）	19（28.3）	16（23.9）
≥5	32（47.8）	15（22.4）	17（25.4）
分化程度				0.476
高分化	8（11.9）	3（4.5）	5（7.4）
中低分化	59（88.1）	31（46.3）	28（41.8）
肿瘤浸润深度				0.297
T1/T2	11（16.4）	4（6.0）	7（10.4）
T3/T4	56（83.6）	30（44.8）	26（38.8）
淋巴结转移				0.397
N0	40（59.7）	18（26.9）	22（32.8）
N1/N2	27（40.3）	15（22.4）	12（17.9）
远处转移				0.975
M0	63（94.0）	31（46.3）	32（47.7）
M1	4（6.0）	2（3.0）	2（3.0）
TNM分期				0.252
Ⅰ/Ⅱ期	40（59.7）	18（26.9）	22（32.8）
Ⅲ/Ⅳ期	27（40.3）	16（23.9）	11（16.4）

图2 敲低ZFAS1对结肠癌细胞的生长及迁移的影响A：转染siRNA后ZFAS1的表达水平；B：敲低ZFAS1，结肠癌细胞的克隆形成数量；C：敲低ZFAS1，结肠癌细胞在MTS实验中的活细胞数量；D：敲低ZFAS1，结肠癌细胞过Transwell微孔滤膜的细胞数量。“*”表示与control siRNA相比，差异在P<0.05水平有统计学意义。

Fig. 2 Knockdown effects of ZFAS1 on the growth and migration of colorectal cancer cells

图3 ZFAS1与ZNFX1表达量的相关性A：ZNFX1在结肠癌细胞系与正常结肠细胞系中的相对表达量；B：敲低ZFAS1，ZNFX1表达水平的变化。“*”表示与CCD841CoN或contrl siRNA相比，差异在P<0.05水平有统计学意义，CCD841CoN—正常结肠上皮细胞系。

Fig.3 The relationship between the expression level of ZFAS1 and ZNFX1

图4 过表达ZNFX1对结肠癌细胞的生长及迁移的影响A：表达载体质粒ZNFX1?1?5757bp（ZNFX1全长）及ZNFX1?1?3646bp（含有2个AAA结构域）的示意图；B：ZNFX1?1?5757bp及ZNFX1?1?3646bp转染结肠癌细胞的过表达效果检测；C：过表达ZNFX1，结肠癌细胞在MTS试验中的活细胞数量；D：过表达ZNFX1，结肠癌细胞的克隆形成数量；E：过表达ZNFX1，结肠癌细胞过Transwell微孔滤膜的细胞数量。“*”表示与pcDNA?NC相比，差异在P<0.05水平有统计学意义。

Fig.4 Proliferation and migration of CRC cells after ZNFX1 overexpression

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长链非编码RNA ZFAS1在结直肠癌中的表达及生物学功能

Expression and Biological Function of Long Noncoding RNA ZFAS1 in Colorectal Cancer

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